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Observatoire océanologique de Banyuls sur mer
Laboratoire Arago

Microscopie Confocal

Le principe repose sur l'observation précise de marquages cellulaires fluorescents par analyse de sections virtuelles (ou plans confocaux) d'échantillons épais (coupes de tissus) ou de cellules entières.

Ces plans confocaux peuvent être compilés pour obtenir une image 3D de l'observation.

 

 

Le microscope confocal: l'OLympus BX 300 est équipé d'un laser Argon/Krypton permet l'excitation à 488nm, à 568nm et à 647nm.

Le système optique offre la possibilité de réaliser du simple ou double marquage, les signaux fluorescents émis sont collectés par les détecteurs sur deux voies et sélectionnés grâce aux filtres optiques:

    - CH1: 510-540nm et ou 510nm

    - CH2: 585-640nm et ou 590nm

 

Exemples d'application:

 

La détection de la colocalisation de protéines marquées par immunofluorescence dans des lignées cellulaires (Even et al 2005)...

 

 

 

La reconnaissance d'une algue toxique:

Alexandrium sp, à l'origine des interdictions de vente et de consommation des coquillage, vue ici en contraste de phase, puis en plans confocaux sommés pour obtenir une image 3D de la cellule après un marquage immunofluorescent (photos N.West LOOB).

 

 

Amphioxus est un céphalochordé, proche de l'ancêtre des chordés, il sert de modèle d'étude de l'évolution et du développement des chordés.

Ci-dessous un exemple de double marquage phalloïdine/tubuline. (Stéphanie Bertrand), PNAS: Amphioxus FGF signaling predicts the acquisition of vertebrate morphological traits, (Berthrand.S et al)

 

Laëtitia Bariat - 02/06/16